Javascript niha di geroka we de neçalak e.Dema ku javascript neçalak be, hin fonksiyonên vê malperê dê nexebitin.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Beşa Zanistê Philippe Deprez, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalonya, Spanya * Van nivîskaran di vê xebatê de hin nêrînên wekhev hene. paşxaneya tevkariyê: Asîdê hîaluronîk (HA) polysaccharîdek xwezayî ye ku ji bo armancên estetîk di hilberîna dagîrkerên çerm de tê bikar anîn.Ji ber ku di nav tevnên mirovan de nîv-jiyanek çend rojan heye, dagirtina dermal a li ser bingeha HA bi kîmyewî têne guhertin da ku jiyana xwe di laş de dirêj bikin.Guhertina herî gelemperî ya di dagirtina HA-based a bazirganî de karanîna 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) ye ku wekî kargêrek xaçê girêdana zincîrên HA ye.BDDE ya mayî an jî bê reaksîyon bi kêmtirîn 2 par li mîlyon (ppm) ne-jehrî tê hesibandin;Ji ber vê yekê, BDDE-ya mayî ya di dagirtina dermal a paşîn de divê were pîvandin da ku ewlehiya nexweş were misoger kirin.Materyal û rêbaz: Ev vekolîn bi berhevkirina kromatografiya şil û spectrometrya girseyî (LC-MS) vedîtin û taybetmendîkirina hilberek ji reaksiyona girêdana xaçerê ya di navbera BDDE û HA de di bin şert û mercên alkalînê de vedibêje.Encam: Piştî analîzên cihêreng, hate dîtin ku şert û mercên alkalîn û germahiya bilind a ku ji bo dezenfektekirina hîdrogela HA-BDDE hatî bikar anîn, avakirina vê hilberê nû, pêkhateya "propylen glycol-mîna" pêşve xist.Analîza LC-MS piştrast kir ku hilberê ji hêla BDDE ve xwedî heman girseya monoîzotopîk e, demek mayînek cûda (tR), û moda vegirtina UV-ya cûda (λ=200 nm) heye.Berevajî BDDE, di analîza LC-MS de hate dîtin ku di bin heman şert û mercên pîvandinê de, ev hilber di 200 nm de rêjeyek tespîtkirina bilindtir e.Encam: Ev encam destnîşan dikin ku di avahiya vê pêkhateya nû de epoksîd tune.Nîqaş ji bo nirxandina xetereya vê hilberê nû ya ku di hilberîna hîdrogela HA-BDDE (dagirkera çermê HA) de ji bo mebestên bazirganî de tê dîtin, vekirî ye.Peyvên sereke: asîda hîaluronîk, dagirtina çermê HA, asîda hîaluronîk a xaç-girêdayî, BDDE, analîza LC-MS, berhilbera BDDE.
Dagirkerên li ser bingeha hîaluronîk asîda (HA) dagirtina çermê ya herî gelemperî û populer in ku ji bo armancên kozmetîkî têne bikar anîn.1 Ev dagirtina çerm hîdrogelek e, bi gelemperî ji> 95% av û 0.5-3% HA pêk tê, ku avahiyek mîna gel dide wan.2 HA polysaccharîdek e û pêkhateya sereke ya matrixa derveyî hucreyî ya vertebrîstan e.Yek ji pêkhateyan.Ew ji (1,4)-glukuronîk asîda-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) yekeyên dîsakarîdê yên ku bi girêdanên glycosîdîk ve girêdayî ne pêk tê.Ev şêweya dîsakarîdê di hemû zîndeweran de yek e.Li gorî hin dagirtina proteîn-based (wek kolajen), ev taybetmendî HA dike molekulek pir biyolojîk.Van dagirtinan dikarin taybetmendiya rêzika amino acîd ku ji hêla pergala berevaniya nexweş ve were nas kirin nîşan bidin.
Dema ku wekî dagirtina çerm tê bikar anîn, sînorê sereke ya HA veguherîna wê ya bilez a di nav tevnan de ye ji ber hebûna malbatek taybetî ya enzîman ku jê re hyaluronidases tê gotin.Heya nuha, gelek guheztinên kîmyewî di avahiya HA de hatine diyar kirin ku nîv-jiyana HA di tevnan de zêde bikin.3 Piraniya van guhertinan hewl didin ku bi girêdana zincîreyên HA ve gihîştina hîaluronidazê ji polîmerên polîsakaridê re kêm bikin.Ji ber vê yekê, ji ber çêbûna piran û girêdanên kovalentî yên navmolekularî yên di navbera avahiya HA û xaçerê de, hîdrogela HA-ya xaç-girêdayî ji HA-ya xwezayî bêtir hilberên hilweşandina antî-enzîmê çêdike.4-6
Heya nuha, ajanên xaçerê yên kîmyewî yên ku ji bo hilberîna HA-ya xaçkirî têne bikar anîn methacrylamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) Û poly (ethylene glycol) diglycidyl ether in.10,11 BDDE niha ajaneya xaçerê ya herî gelemperî tê bikaranîn e.Her çend ev celeb hîdrogel bi dehsalan hatine îsbat kirin ku ewledar in, ajanên xaçerê yên ku têne bikar anîn reagentên reaktîf in ku dibe ku sîtotoxic û, di hin rewşan de, mutajenîk bin.12 Ji ber vê yekê, naveroka wan a bermayî di hîdrogela dawîn de divê zêde be.BDDE bi ewle tê hesibandin dema ku giraniya mayî ji 2 par li mîlyon (ppm) kêmtir be.4
Gelek rêbaz hene ku ji bo tesbîtkirina berhevoka BDDE-ya kêm-mayî, asta girêdana xaçerê û pozîsyona veguheztinê di hîdrogelên HA de, wek kromatografiya gazê, kromatografiya dûrxistina mezinbûnê ya bi spektrometriya girseyî (MS), rêbazên pîvandina floransê ya rezonansa magnetîkî ya nukleerî (NMR), û Kromatografiya şilavê ya bi performansa bilind (HPLC) bi rêza dîodê ve girêdayî ye.13-17 Vê lêkolînê tespîtkirin û taybetmendiya hilberek ji hêla HA-ya hîdrogela paşîn a xaç-girêdayî ya ku ji ber reaksiyona BDDE û HA-yê di bin şert û mercên alkaline de hatî hilberandin vedibêje.HPLC û kromatografiya şil-spektrometriya girseyî (analîz LC-MS).Ji ber ku jehrîbûna vê hilberê ji hêla BDDE-ê ve nenas e, em pêşniyar dikin ku pîvana bermayiya wê bi rengek mîna rêbaza ku bi gelemperî li ser BDDE-ê di hilbera paşîn de tê kirin were destnîşankirin.
Xwêya sodyûmê ya HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japonya) bi giranî 1,368,000 Da (rêbaza Laurent) 18 û vîskozîteyek xwerû ya 2,20 m3/kg heye.Ji bo reaksiyona crosslinking, BDDE (≥95%) ji Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA) hate kirîn.Salona tampon a fosfatê ya bi pH 7.4 ji Şirketa Sigma-Aldrich hate kirîn.Hemî çareserker, acetonitrile û ava ku di analîza LC-MS de hatî bikar anîn ji kalîteya pola HPLC ve hatî kirîn.Asîdê formîk (98%) wekî pola reagentê tê kirîn.
Hemî ceribandin li ser pergalek Acquity UPLC (Waters, Milford, MA, USA) hatin kirin û bi API 3000 spektrometerek girseyî ya sêqalî ya çaralî ya ku bi çavkaniyek ionîzasyona elektrospray ve hatî ve girêdayî ye (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Senteza hîdrogelên HA-yê yên xaç-girêdayî bi zêdekirina 198 mg BDDE li çareseriyek 10% (w/w) sodyûm hyaluronate (NaHA) li ber hebûna 1% alkali (sodyûm hîdroksîd, NaOH) dest pê kir.Giraniya dawî ya BDDE di tevliheviya reaksiyonê de 9,9 mg / mL (0,049 mM) bû.Dûv re, tevliheviya reaksiyonê bi tevahî hate tevlihev kirin û homojen kirin û destûr dan ku 4 demjimêran li 45 ° C berdewam bike.19 PH ya reaksiyonê di 12-ê de tê parastin.
Dûv re, tevliheviya reaksiyonê bi avê hate şûştin, û hîdrogela HA-BDDE ya dawîn hate parzûn kirin û bi tampon PBS re hate rijandin da ku bigihîje giraniya HA ji 10 heta 25 mg / mL, û pH-ya paşîn a 7.4.Ji bo sterilîzekirina hîdrogelên HA-yê yên xaç-girêdayî yên hilberandî, van hemî hîdrogel têne otoklavekirin (120°C ji bo 20 hûrdeman).Hîdrogela BDDE-HA ya paqijkirî heya analîzê di 4°C de tê hilanîn.
Ji bo analîzkirina BDDE-ya ku di hilbera HA-ya xaç-girêdayî de heye, nimûneyek 240 mg hate giran kirin û kete kuna navendê (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; volume 0.5 mL) û li germahiya odeyê di 10,000 rpm de santrîfuj kirin. 10 deqîqe.Bi tevahî 20 µL şilava dakêşanê hate berhev kirin û analîz kirin.
Ji bo analîzkirina standarda BDDE (Sigma-Aldrich Co) di bin şert û mercên alkaline (1%, 0.1% û 0.01% NaOH), heke şert û mercên jêrîn pêk werin, nimûneya şil 1:10, 1:100, an heya heya 1:1,000,000 Ger hewce be, ji bo analîzê ava deionized MilliQ bikar bînin.
Ji bo materyalên destpêkê yên ku di reaksiyona girêdana xaçê de têne bikar anîn (HA 2%, H2O, 1% NaOH, û 0.049 mM BDDE), 1 mL ji her nimûneyek ku ji van materyalan hatî amadekirin bi karanîna heman mercên analîzê hate analîz kirin.
Ji bo destnîşankirina taybetmendiya lûtkeyên ku di nexşeya îonê de xuya dibin, 10 µL çareseriya standard BDDE ya 100 ppb (Sigma-Aldrich Co) li nimûneya 20 μL hate zêdekirin.Di vê rewşê de, giraniya paşîn a standard di her nimûneyê de 37 ppb e.
Pêşî, çareseriyek stokê ya BDDE ya bi giraniya 11,000 mg/L (11,000 ppm) amade bikin û 10 μL BDDE-ya standard (Sigma-Aldrich Co) bi 990 μL Avê MilliQ (dûrbûna 1,1 g/mL) vekin.Vê çareseriyê bikar bînin da ku çareseriyek BDDE ya 110 μg/L (110 ppb) wekî nermbûnek standard a navîn amade bikin.Dûv re, diluentê standard BDDE-ya navîn (110 ppb) bikar bînin da ku xêzika standard amade bikin bi rijandina navberê çend caran ji bo bidestxistina giraniya xwestî ya 75, 50, 25, 10, û 1 ppb.Wekî ku di Xiflteya 1-ê de tê xuyang kirin, tê dîtin ku kêşeya standard a BDDE ji 1.1 heya 110 ppb xwedan rêzek baş e (R2> 0.99).Rêjeya standard di çar ceribandinên serbixwe de hate dubare kirin.
Xiflteya 1 Kûpa kalibrasyona standard a BDDE ku ji hêla analîza LC-MS ve hatî wergirtin, tê de têkiliyek baş tê dîtin (R2>0.99).
Kurtkirin: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî.
Ji bo ku standardên BDDE yên di HA-ya-girêdayî de û standardên BDDE yên di çareseriya bingehîn de têne nasîn û hejmartin, analîza LC-MS hate bikar anîn.
Veqetandina kromatografiyê li ser stûnek LUNA 2.5 μm C18(2)-HST (50×2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) hate bidestxistin û di dema analîzê de li germahiya odeyê (25 °C) hate girtin.Qonaxa gerok ji acetonitrile (solve A) û avê (solvent B) pêk tê ku %0,1 asîda formîk heye.Qonaxa mobîl ji hêla elusyona gradientê ve tê derxistin.Pîvan wiha ye: 0 deqîqe, 2% A;1 deqe, 2% A;6 deqîqe, 98% A;7 deqîqe, 98% A;7.1 deqîqe, 2% A;10 hûrdem, %2 A. Dema xebitandinê 10 hûrdeman e û qebareya derzîlêdanê 20 µL ye.Dema ragirtinê ya BDDE bi qasî 3,48 hûrdem e (li gorî ceribandinan ji 3,43 heta 4,14 hûrdeman digire).Qonaxa mobîl bi rêjeya herikîna 0.25 mL / min ji bo analîza LC-MS hate pomp kirin.
Ji bo analîzkirin û pîvandina BDDE ji hêla MS ve, pergala UPLC (Waters) bi API 3000 spektrometerek girseyî ya çarpolê ya sêalî (AB SCIEX) re ku bi çavkaniyek ionîzasyona elektrospray ve hatî peyda kirin, tête hev kirin, û analîz di moda îyona erênî (ESI+) de tête kirin.
Li gorî analîza perçeya îonê ya ku li ser BDDE-yê hatî kirin, perçeya ku herî zêde zexm e, hate destnîşankirin ku ew perçeya ku bi 129,1 Da re têkildar e (Wêne 6).Ji ber vê yekê, di moda çavdêriya pir-îyonan de (MIM) ji bo hejmartinê, veguheztina girseyê (rêjeya girse-barkirinê [m/z]) ya BDDE 203.3/129.1 Da ye.Di heman demê de ew ji bo analîza LC-MS moda şopandina tevahî (FS) û moda şopandina îyona hilberê (PIS) bikar tîne.
Ji bo verastkirina taybetmendiya rêbazê, nimûneyek vala (qonaxa mobîl a destpêkê) hate analîz kirin.Di nimûneya vala de bi veguheztina girseyî ya 203.3/129.1 Da îşaretek nehat dîtin.Di derbarê dubarebûna azmûnê de, 10 derziyên standard ên 55 ppb (di nîvê kêşeya kalibrasyonê de) hatin analîz kirin, ku di encamê de veguheztinek standard a mayî (RSD) <5% (daneyên nayên xuyang kirin) derket.
Naveroka BDDE ya mayî di heşt hîdrogelên HA-yê yên xweser ên xweser ên BDDE yên xaç-girêdayî de, ku bi çar ceribandinên serbixwe re têkildar in, hate hejmartin.Wekî ku di beşa "Materyal û Rêbaz" de hatî diyar kirin, hejmarkirin bi nirxa navînî ya kêşeya paşverû ya helandina standard BDDE, ku bi lûtkeya bêhempa ya ku di veguheztina girseyî ya BDDE ya 203.3/129.1 Da, bi ragirtinê ve hatî kifş kirin, tê nirxandin. dema 3.43 ber 4.14 deqeyan Li bendê ne.Wêneyê 2 mînakek kromatograma standarda referansa BDDE ya 10 ppb nîşan dide.Tablo 1 naveroka BDDE ya mayî ya heşt hîdrogelên cihêreng kurt dike.Rêjeya nirxê 1 heta 2,46 ppb e.Ji ber vê yekê, giraniya mayî ya BDDE ya di nimûneyê de ji bo karanîna mirovî tê pejirandin (<2 ppm).
Wêne 2 Kromatograma îyonê ya standard referansa 10 ppb BDDE (Sigma-Aldrich Co), veguheztina MS (m/z) ku bi analîza LC-MS ya 203.30/129.10 Da (di moda MRM ya erênî de) hatî wergirtin.
Kurtkirin: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî;MRM, çavdêriya reaksiyonê ya pirjimar;MS, girseyî;m/z, rêjeya girseya barkirinê.
Nîşe: Nimûneyên 1-8 hîdrogelên HA yên bi xaç-girêdayî BDDE yên xweserkirî ne.Rêjeya mayî ya BDDE ya di hîdrogelê de û lûtkeya dema ragirtina BDDE jî têne ragihandin.Di dawiyê de, hebûna lûtkeyên nû yên bi demên ragirtinê yên cihêreng jî tê ragihandin.
Kurtkirin: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, asîda hîaluronîk;MRM, çavdêriya reaksiyonê ya pirjimar;tR, dema ragirtinê;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî;RRT, dema ragirtina nisbî.
Ecêb e, analîza kromatograma îyonê ya LC-MS destnîşan kir ku li ser bingeha hemî nimûneyên hîdrogelê yên HA-ya xaç-girêdayî yên xweser ên ku hatine analîz kirin, di dema ragirtinê ya kurt a 2.73 heta 3.29 hûrdem de lûtkeyek zêde hebû.Mînakî, Xiflteya 3 kromatograma îyonê ya nimûneyek HA-ya xaç-girêdayî nîşan dide, ku li wir lûtkeyek din di demek mayînde ya cûda ya bi qasî 2.71 hûrdeman de xuya dike.Di navbera lûtkeya ku nû hatiye dîtin û lûtkeya ji BDDE de dema ragirtinê ya têkildar (RRT) 0,79 hate dîtin (Table 1).Ji ber ku em dizanin ku lûtkeya ku nû hatiye dîtin di stûna C18 de ku di analîza LC-MS de tê bikar anîn de kêmtir tê girtin, dibe ku lûtkeya nû ji BDDE-ya polartir re têkildar be.
Figure 3 Kromatograma îyonê ya nimûneya hîdrogelê ya HA ya xaç-girêdayî ya ku ji hêla LC-MS ve hatî wergirtin (Veguheztina girseyî ya MRM 203.3/129.0 Da).
Kurtekirin: HA, asîda hîaluronîk;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî;MRM, çavdêriya reaksiyonê ya pirjimar;RRT, dema ragirtina nisbî;tR, dema ragirtinê.
Ji bo ku îhtîmala ku lûtkeyên nû yên ku têne dîtin dibe ku di eslê xwe de di madeyên xav ên hatine bikar anîn de gemarî bin, ev madeyên xav jî bi karanîna heman rêbaza analîzê ya LC-MS hatine analîz kirin.Materyalên destpêkê yên ku hatine analîz kirin av, 2% NaHA di avê de, 1% NaOH di avê de, û BDDE di heman giraniyê de ku di reaksiyona girêdanê de tê bikar anîn hene.Kromatograma îyonê ya materyala destpêkê ya ku hatî bikar anîn ti pêkhateyek an lûtkeyê nîşan neda, û dema ragirtina wê bi lûtkeya nû ya hatî dîtin re têkildar e.Ev rastî vê ramanê ji holê radike ku ne tenê maddeya destpêkê dibe ku her pêkhateyek an maddeyên ku dibe ku di prosesa analîzê de mudaxele bikin hebe, lê îşaretek gemarîbûna mimkun bi hilberên laboratîfên din re tune.Nirxên hûrbûnê yên ku piştî analîza LC-MS ya BDDE û lûtkeyên nû hatine bidestxistin di Tabloya 2 (nimûneyên 1-4) û kromatograma îonê de di Xiflteya 4 de têne xuyang kirin.
Nîşe: Nimûneyên 1-4 bi madeyên xav ên ku ji bo hilberîna hîdrogelên HA-yê yên bi xaç-girêdayî BDDE yên xweserkirî têne bikar anîn re têkildar in.Ev nimûneyên otoclaved ne.
Kurtkirin: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, asîda hîaluronîk;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî;MRM, çavdêriya reaksiyonê ya pirjimar.
Xiflteya 4 bi kromatograma LC-MS ya nimûneyek madeya xav a ku di reaksiyona girêdana xaçê ya HA û BDDE de hatî bikar anîn re têkildar e.
Nîşe: Hemî van di heman konsantasyon û rêjeya ku ji bo pêkanîna reaksiyona girêdanê tê bikar anîn têne pîvandin.Hejmarên madeyên xav ên ku ji hêla kromatogramê ve têne analîz kirin li gorî: (1) av, (2) 2% çareseriya avî HA, (3) 1% çareseriya avê ya NaOH.Analîza LC-MS ji bo veguheztina girseyî ya 203.30 / 129.10 Da (di moda MRM ya erênî de) tête kirin.
Kurtkirin: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, asîda hîaluronîk;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî;MRM, çavdêriya reaksiyonê ya pirjimar.
Şert û mercên ku bûne sedema çêbûna lûtkeyên nû hatine lêkolîn kirin.Ji bo ku were lêkolîn kirin ka şert û mercên reaksiyonê yên ku ji bo hilberandina hîdrogela HA-ya xaç-girêdayî çawa bandorê li reaktîvîteya xaçerê ya BDDE dike, ku dibe sedema avakirina lûtkeyên nû (hilberên gengaz), pîvandinên cûda hatin kirin.Di van tespîtan de, me xaça BDDE ya dawîn lêkolîn û analîz kirin, ku bi hûrgelên cihêreng ên NaOH (0%, 1%, 0.1%, û 0.01%) di navgînek avî de hate derman kirin, li dûv an bêyî otoclaving.Pêvajoya bakteriyan ji bo simulkirina heman şert û mercan heman rêbaz e ku ji bo hilberandina hîdrogela HA-ya-girêdayî tê bikar anîn.Wekî ku di beşa "Materyal û Rêbaz" de tête diyar kirin, veguheztina girseyî ya nimûneyê ji hêla LC-MS ve heya 203.30 / 129.10 Da hate analîz kirin.BDDE û giraniya lûtkeya nû têne hesab kirin, û encam di tabloya 3-ê de têne xuyang kirin. Di nimûneyên ku nehatine otoklav kirin de lûtkek nû nehat dîtin, bêyî ku hebûna NaOH di çareseriyê de hebe (mînakên 1-4, Tablo 3).Ji bo nimûneyên otoclaved, lûtkeyên nû tenê di hebûna NaOH-ê de di çareseriyê de têne kifş kirin, û çêbûna lûtkê xuya dike ku bi giraniya NaOH-ê ya di çareseriyê de ve girêdayî ye (nimûneyên 5-8, Tablo 3) (RRT = 0,79).Xiflteya 5 mînakek kromatogramek îyonê nîşan dide, ku du nimûneyên otoclaved di hebûn an tunebûna NAOH de nîşan dide.
Kurtkirin: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî;MRM, çavdêriya reaksiyonê ya pirjimar.
Nîşe: Kromatograma jorîn: Nimûne bi 0,1% çareseriya avê ya NaOH hate derman kirin û otoklava (120 ° C ji bo 20 hûrdeman) hate girtin.Kromatograma jêrîn: Nimûne bi NaOH nehate derman kirin, lê di heman şert û mercan de otoklav kirin.Veguheztina girseyî ya 203.30 / 129.10 Da (di moda MRM ya erênî de) ji hêla LC-MS ve hate analîz kirin.
Kurtkirin: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî;MRM, çavdêriya reaksiyonê ya pirjimar.
Di hemî nimûneyên otoklavkirî de, bi NaOH an bêyî wê, giraniya BDDE pir kêm bû (heta 16,6 carî) (mînakên 5-8, Tablo 2).Kêmbûna giraniya BDDE dibe ku ji ber vê yekê be ku di germahiyên bilind de, av dikare wekî bingehek (nukleofîl) tevbigere ku zengila epoksîdê ya BDDE veke da ku pêkhateyek 1,2-dîol çêbike.Kalîteya monoîzotopîk a vê kompleksê ji ya BDDE-yê cûda ye û ji ber vê yekê dê bandor nebe.LC-MS veguherînek girseyî ya 203.30 / 129.10 Da.
Di dawiyê de, van ceribandinan destnîşan dikin ku hilberîna lûtkeyên nû bi hebûna BDDE, NAOH, û pêvajoya otoclavingê ve girêdayî ye, lê ti têkiliya wê bi HA re tune.
Pîvaza nû ya ku di demek ragirtinê de bi qasî 2.71 hûrdeman hate dîtin piştre ji hêla LC-MS ve hate destnîşan kirin.Ji bo vê armancê, BDDE (9,9 mg / mL) di çarçoveyek avê ya 1% NaOH de hate înkubakirin û otoclaved.Di Tabloya 4-ê de, taybetmendiyên lûtkeya nû bi lûtkeya referansa BDDE ya naskirî re têne berhev kirin (dema ragirtinê bi qasî 3,47 hûrdem).Li ser bingeha analîza perçebûna ionê ya her du lûtkeyan, meriv dikare were encamdan ku lûtkeya bi dema ragirtinê ya 2,72 hûrdem heman perçeyan wekî lûtkeya BDDE nîşan dide, lê bi tundiyên cûda (Wêne 6).Ji bo lûtkeya ku bi dema ragirtinê (PIS) ya 2,72 hûrdemî re têkildar e, piştî perçebûnê li girseyek 147 Da lûtkeyek tundtir hate dîtin.Di berhevoka BDDE (9,9 mg/mL) de ku di vê tespîtê de hatî bikar anîn, awayên cûda yên vegirtinê (UV, λ=200 nm) di spektra ultraviolet de jî piştî veqetandina kromatografiyê hatin dîtin (Wêne 7).Pîka bi dema ragirtinê ya 2,71 hûrdeman hîn jî di 200 nm de xuya ye, dema ku lûtkeya BDDE di heman şert û mercan de di kromatogramê de nayê dîtin.
Tablo 4 Encamên taybetmendiyê yên lûtkeya nû bi dema ragirtinê ya bi qasî 2,71 hûrdem û lûtkeya BDDE bi dema ragirtinê 3,47 hûrdem
Nîşe: Ji bo bidestxistina van encaman, analîzên LC-MS û HPLC (MRM û PIS) li ser du lûtkeyan hatin kirin.Ji bo analîza HPLC, tespîtkirina UV bi dirêjahiya pêlê 200 nm tê bikar anîn.
Kurtkirin: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC, kromatografiya şikilî ya performansa bilind;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî;MRM, çavdêriya reaksiyonê ya pirjimar;m/z, rêjeya girseya barkirinê;PIS, hilberandina Ionê;ronahiya ultraviolet, ronahiya ultraviolet.
Nîşe: Parçeyên girseyî bi analîza LC-MS (PIS) têne wergirtin.Kromatograma jorîn: spektora girseyî ya perçeyên nimûneyên standard BDDE.Kromatograma jêrîn: Spectruma girseyî ya lûtkeya nû ya ku hatî tespît kirin (RRT ku bi lûtkeya BDDE ve girêdayî ye 0,79 e).BDDE di çareseriya 1% NaOH de hate hilberandin û otoclaved.
Kurtkirin: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografiya şil û spektrometriya girseyî;MRM, çavdêriya reaksiyonê ya pirjimar;PIS, îyona hilberandinê;RRT, dema ragirtina nisbî.
Figure 7 Kromatograma îyonê ya 203.30 Da îona pêşîn, û (A) lûtkeya nû ya bi dema ragirtinê 2.71 hûrdem û (B) vedîtina UV ya lûtkeya standard referansa BDDE di 3.46 hûrdeman de li 200 nm.
Di hemî hîdrogelên HA-yên xaç-girêdayî yên hilberandî de, hate dîtin ku giraniya mayî ya BDDE piştî pîvandina LC-MS <2 ppm bû, lê di analîzê de lûtkeyek nû ya nenas xuya bû.Ev lûtkeya nû bi hilbera standard BDDE re hev nagire.Hilbera standard BDDE di moda MRM-ya erênî de jî di heman veguheztina kalîteyê (MRM veguhertina 203.30/129.10 Da) de derbas bûye.Bi gelemperî, rêbazên analîtîkî yên din ên wekî kromatografiyê wekî ceribandinên sînor têne bikar anîn da ku BDDE di hîdrogelan de tespît bikin, lê sînorê tespîta herî zêde (LOD) hinekî ji 2 ppm kêmtir e.Ji hêla din ve, heya nuha, NMR û MS hatine bikar anîn da ku asta girêdana xaçerê û/an guheztina HA-yê di perçeyên yekîneya şekirê yên hilberên HA-ya-girêdayî de destnîşan bikin.Armanca van teknîkan çu carî ne ew bû ku tespîtkirina mayî ya BDDE-ya mayî di tansiyonên weha kêm de ku em di vê gotarê de diyar dikin (LOD ya rêbaza meya LC-MS = 10 ppb).
Dema şandinê: Sep-01-2021